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行業(yè)應(yīng)用

蔓荊子提取物的有效成分研究及其含量測(cè)定方案

時(shí)間:2015-11-2 9:58:43      閱讀:1998

一、方案概述

蔓荊子為常用中藥材,中國(guó)藥典收載蔓荊子商品為馬鞭草科植物單葉蔓荊或三葉蔓荊的干燥成熟果實(shí)。單葉蔓荊分布廣,產(chǎn)量大,在我國(guó)主要分布在山東、江西一帶。蔓荊子作為中藥,具有疏散風(fēng)熱、清利頭目的功效。

對(duì)蔓荊子提取物進(jìn)行分離和測(cè)定,分析出有效成分,并對(duì)其進(jìn)行含量測(cè)定,可以對(duì)蔓荊子提取物的生產(chǎn)控制提供可靠依據(jù)。

二、蔓荊子提取物的分離鑒定

1、儀器、試劑與提取物

1、1 儀器  

顯微熔點(diǎn)儀,紫外分光光度計(jì),紅外光譜儀,核磁共振儀,色質(zhì)聯(lián)用儀。

1、2  試劑  

層析用硅膠,凝膠樹(shù)脂,石油醚、乙酸乙酯、氯仿、甲醇均為分析純。

1、3  提取物  

蔓荊子提取物

2、操作方法

取蔓荊子提取物1kg,用95%乙醇溶解,濾過(guò),濾液回收乙醇并濃縮成稠膏,拌入硅膠,干燥后上硅膠柱層析,以石油醚-乙酸乙酯梯度洗脫,分別收集,根據(jù)薄層點(diǎn)板定性檢查,取蔓荊子黃素部分,再上凝膠樹(shù)脂,用氯仿-甲醇(1:1)洗脫,結(jié)晶分離,得兩個(gè)化合物,一個(gè)為黃色細(xì)針狀結(jié)晶,一個(gè)為黃色結(jié)晶。

黃色結(jié)晶,鹽酸-鎂粉反應(yīng)陽(yáng)性,加三氯化鋁-鹽酸、加醋酸鈉10min后不減弱,根據(jù)以上化學(xué)性質(zhì)及光譜數(shù)據(jù),鑒定為蔓荊子黃素。

三、蔓荊子黃素的含量測(cè)定

1、儀器

高效液相色譜儀,自動(dòng)進(jìn)樣器,十萬(wàn)分之一電子天平電子分析天平

2 、試劑 

甲醇、磷酸均為分析純,水為雙重蒸餾水,對(duì)照品蔓荊子黃素自制,經(jīng)HPLC分析,純度為99.58%,蔓荊子提取物。

3、含量測(cè)定

3、1 色譜條件:色譜柱C18柱,流動(dòng)相:甲醇-0.4%磷酸溶液(60:40),檢測(cè)波長(zhǎng)258NM,流速1.0ml/min,柱溫:30℃

3、2 標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的制備:精密稱(chēng)取干燥至恒重的蔓荊子黃素對(duì)照品1.5mg,置于10ml容量瓶中,甲醇溶解定容,作為對(duì)照品溶液。精密吸取上述溶液1.0、2.0、3.0、4.0、5.0ml置10ml容量瓶中,用甲醇稀釋至刻度,照上述條件測(cè)定,以蔓荊子黃素的峰面積積分值為縱坐標(biāo),其濃度為橫坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn),得回歸方程:C=2.225×10-7A-4.72×10-4,r=0.9999,其線(xiàn)性范圍在0.015mg/ml—0.075mg/ml。

3、3 樣品的測(cè)定:精密稱(chēng)取蔓荊子提取物25mg,置于50ml容量瓶中,加甲醇溶解,超聲振蕩,定容過(guò)濾,取續(xù)濾液,即為供試品溶液。照上述方法測(cè)定,計(jì)算含量即得。

3、4 回收率實(shí)驗(yàn):精密稱(chēng)取已知含量的蔓荊子提取物25mg,加入蔓荊子黃素對(duì)照品0.75mg,按照樣品測(cè)定項(xiàng)下進(jìn)行處理,測(cè)定,計(jì)算回收率:98.18%,RSD=1.46%。

3、5 精密度試驗(yàn):在上述條件下,對(duì)同一濃度的對(duì)照品溶液連續(xù)6次進(jìn)樣,計(jì)算峰面積平均值,RSD為0.945%。

3、6 重現(xiàn)性試驗(yàn) 按照樣品測(cè)定方法,對(duì)同一批號(hào)樣品進(jìn)行5次平行試驗(yàn),蔓荊子黃素含量RSD為1.72%。


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