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技術(shù)支持

液相色譜儀流動相和緩沖液的pH值說明

時間:2017-5-3 10:12:26      閱讀:1635

一、液相色譜儀流動相的pH

 采用反相色譜法分離弱酸(3≤pKa≤7)或弱堿(7≤pKa≤8)樣品時,通過調(diào)節(jié)流動相的pH值,以抑制樣品組分的解離,增加組分在固定相上的保留,并改善峰形的技術(shù)稱為反相離子抑制技術(shù)。

 對于弱酸,流動相的pH值越小,組分的k值越大,當(dāng)pH值遠遠小于弱酸的pKa值時,弱酸主要以分子形式存在;對弱堿,情況相反。

 分析弱酸樣品時,通常在流動相中加入少量弱酸,常用50mmol/L磷酸鹽緩沖液和1%醋酸溶液;分析弱堿樣品時,通常在流動相中加入少量弱堿,常用50mmol/L磷酸鹽緩沖液和30mmol/L三乙胺溶液。

    注:流動相中加入有機胺可以減弱堿性溶質(zhì)與殘余硅醇基的強相互作用,減輕或消除峰拖尾現(xiàn)象。所以在這種情況下有機胺(如,三乙胺)又稱為減尾劑或除尾劑。

    (三乙胺triethylamine 氨分子中的氫原子被3個乙基取代的產(chǎn)物。分子式(CH3CH2)3N。易揮發(fā)的無色液體,有氨的氣味。熔點-114.7℃,沸點89.3℃,相對密度0.7275(20/4℃)。溶于水和乙醇、乙醚等有機溶劑。三乙胺有堿性,與無機酸能生成易溶于水的鹽類�?捎蒒,N-二乙基乙酰氨與氫化鋁鋰反應(yīng)制取,也可用乙醇胺進行氣相烷基化反應(yīng)合成。用于制橡膠硫化促進劑、潤濕劑和殺菌劑等,也可用作溶劑和用于合成四級銨化合物。)

二、如何選擇緩沖液pH

 在選擇緩沖液pH值之前,應(yīng)先了解被分析物的Pka,高于或低于Pka兩個pH值單位的,有助于獲得好的、尖銳的峰,從pH公式:pH=Pka+log([A-]/[A])得知,溶液pH值高于或低于Pka兩個單位,化合物中99%以一種形式存在,而一種形式存在的化合物才能獲得好的尖銳的峰。

 顯示的是它的離子形式和中性化合物的轉(zhuǎn)變,苯甲酸的Pka等于4.2,理論上由pH公式得知,當(dāng)溶液pH值等于2.2時,99%的苯甲酸以中性化合物存在,pH值等于6.2時99%的苯甲酸以離子形式存在,所以當(dāng)緩沖液pH值等于2.2時,中性化合物以羧酸形式保留于反相柱。

 當(dāng)化合物只有氨基時,緩沖體系的選擇十分簡單,大多數(shù)氨基化合物在pH值小于9時都被質(zhì)子化,所以所有pH值在7或更低的溶液均適合應(yīng)用,你也許會問水的pH值大約是7,為什么還用緩沖鹽,因為緩沖鹽有助于增加方法的可靠性,以及色譜峰的尖銳性,pH值的降低有助于氨基化合物保留的減弱,減小化合物與硅膠表面硅羥基的作用,而使峰更尖銳,任何緩沖液均可應(yīng)用于氨基化合物的分析,但我們認(rèn)為pH值等于3的磷酸鉀鹽最適合用于氨基化合物的分析。

 在上面兩個例子中,pH=3的磷酸鉀鹽都能獲得良好的應(yīng)用,在一般情況下,它是含羧基和氨基化合物分析中最好的緩沖液,并且我們認(rèn)為在氨基化合物分析中鉀鹽比鈉鹽更好。

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