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行業(yè)應(yīng)用

蔬果中維生素C含量的檢測(cè)方法

時(shí)間:2015-11-4 9:41:40      閱讀:1827

維生素C又叫抗壞血酸,廣泛存在于植物組織中,新鮮的水果、蔬菜中含量較多。是一種水溶性小分子生物活性物質(zhì),也是人體需要量最大的一種維生素。

維生素C具有還原性,可以與許多氧化劑發(fā)生氧化還原反應(yīng),因此可以利用其還原性測(cè)定維生素C的含量。

目前食品中測(cè)定維生素C含量的方法有碘量法、滴定法、原子吸收分光光度法(原子吸收分光光度計(jì))、紫外可見分光度法(紫外可見分光光度計(jì))、色譜法(液相色譜儀)、電化學(xué)法等。 

一、原子吸收分光光度法

利用原子吸收分光光度法問接測(cè)定維生素C的含量,是利用維生素C可以與一些金屬離子發(fā)生氧化還原反應(yīng),通過測(cè)定反應(yīng)掉的金屬離子的量,進(jìn)而間接計(jì)算出維生素c的含量。
1.1以銀離子作為氧化劑的間接原子吸收分光光度法
    以銀離子作為氧化劑的間接原子吸收分光光度法,是利用維生素C分子中的有二烯醇基具強(qiáng)還原性,可被硝酸銀氧化為去氫維生素C,同時(shí)產(chǎn)生黑色銀沉淀。
     
沉淀經(jīng)離心分離后,將分離得到的沉淀用硝酸溶解后,再利用原子吸收分光光度計(jì)測(cè)定銀離子的含量,從而接測(cè)得維生素C含量,具體測(cè)定方法如下:
    
配制一系列濃度的維生素C標(biāo)準(zhǔn)溶液,依次吸取一定量的維生素C標(biāo)準(zhǔn)溶液置于10mL離心管中,分別加入2mL(1mg/mL) Ag+標(biāo)準(zhǔn)溶液,然后加水使總體積為4mL,搖勻,在室溫下避光放置35min離心分離棄去上清液,用2mL超純水洗滌沉淀3次,然后用l:1的濃硝酸3mL溶解沉淀,移入50mL的容量瓶中,加水稀釋至刻度。噴入空氣-乙炔火焰分別測(cè)定其吸光度,以維生素C標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度為橫坐標(biāo),以測(cè)得的吸光度值為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。最后將處理過的待測(cè)樣按上述方法測(cè)定其維生素C含量。
    
上述方法巾維生素C標(biāo)準(zhǔn)溶液及樣品的配制都是利用2%的檸檬酸作為溶劑,并在棕色瓶中保存,原因是維生素C在溶液中不穩(wěn)定,遇氧氣、光、熱、堿性物質(zhì)易受破壞,而在適當(dāng)?shù)乃嵝詶l件下比較穩(wěn)定,用2%的檸檬酸溶液來配制維生素C標(biāo)準(zhǔn)溶液,減緩了維生素C被氧化的速度,同時(shí)消除了一定外界因素的十?dāng)_,使得測(cè)定結(jié)果比較穩(wěn)定。
1.2 以銅離子作為氧化劑的間接原子吸收分光光度法
    該方法是利用維生素C在酸性介質(zhì)中維生素C可將Cu2+定量的還原為Cu+,然后Cu+SCN-反應(yīng)生成CuSCN沉淀,在高速離心機(jī)下有效地分離出CuSCN沉淀,洗滌后再經(jīng)濃硝酸溶解,用原子吸收法測(cè)定沉淀中的含銅量,即可推知樣品中維生素C的含量。具體測(cè)定方法如下:
    
分別吸取1mL配制的含一定量維生素C的標(biāo)準(zhǔn)溶液(隨配隨用)(分別含維生素C 50、100、200300、400、500 μg)和樣品提取液,依次放置于已編號(hào)的15mL離心管中,各加入1mLCuSO4飽和溶液、1mL濃度為2%硫氰酸銨溶液、0.5mL鹽酸-醋酸鈉緩沖液和0.5 mL飽和NaCl溶液充分混和,稍后離心分離,棄去上層清液,小心地用少量水洗滌沉淀23(注意每次用水不能超過1 mL),加入0.5mL硝酸溶解后,轉(zhuǎn)移至lO0mL的容量瓶中加水定容至刻度線,搖勻。分別用原子吸收分光光度計(jì)測(cè)定其含銅量,由所得的維生素C含量的標(biāo)準(zhǔn)曲線,可以得到相應(yīng)樣品的試驗(yàn)結(jié)果。
    
該方法所得的試驗(yàn)結(jié)果相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD5%以內(nèi)加標(biāo)回收率在96.56%~100.67%,其精密度和準(zhǔn)確度均達(dá)到痕量分析要求。此方法的線性相關(guān)系數(shù)R=O 9989,表明相關(guān)性很好。

二、紫外可見分光光度法

利用紫外分光光度法測(cè)定維生素C的含量是基于維生素c在紫外光區(qū)有特征吸收,但是因?yàn)榫S生素C結(jié)構(gòu)中具有不飽和鍵,具有還原性,不易穩(wěn)定存在,直接測(cè)定誤差較大。所以在利用紫外分光光度法測(cè)定時(shí),維生素標(biāo)準(zhǔn)溶液和待測(cè)樣的配制條件非常重要。曾國(guó)富,黃玉英研究發(fā)現(xiàn),維生索CCTAB-C5H11OH-H2O微乳液體系中非常穩(wěn)定,它存在于微乳液滴膜的內(nèi)側(cè),與滲透進(jìn)入液滴膜外側(cè)的溶液氧接觸的機(jī)會(huì)極少,該體系能極大地提高維生素C的穩(wěn)定性。
    
利用維生素C具有對(duì)紫外產(chǎn)生吸收和對(duì)堿穩(wěn)定的特性,建立紫外分光光度快速測(cè)定水果、蔬菜維生素c的新方法。根據(jù)維生素C具有對(duì)紫外產(chǎn)生吸收和對(duì)堿不穩(wěn)定的特性,于波長(zhǎng)243nm處測(cè)定樣品溶液與堿處理樣品兩者吸光度之差,通過查校準(zhǔn)曲線,即可計(jì)算樣品巾維生素C的含量。此法操作簡(jiǎn)單、快速準(zhǔn)確、重現(xiàn)性好,結(jié)果令人滿意。特別適合含深色樣品的測(cè)定。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明該方法簡(jiǎn)單易行,結(jié)果準(zhǔn)確、靈敏度高,檢出限低,可快速測(cè)定水果、蔬菜中維生素C,值得推廣應(yīng)用。
    
0450μgmL線性范圍內(nèi),以cu2+作催化劑,以溶解氧將還原型維生素C氧化為在246.0 nm處無吸收的氧化型Vc,實(shí)現(xiàn)了樣品各紫外干擾成分的本底校正,建立了種測(cè)定果蔬Vc的新方法。該方法中維生素C破壞條件的選擇尤為重要,確定條件為:Cu用量為30 g,反應(yīng)溫度為70℃,反應(yīng)時(shí)間為20min,加熱條件下,反應(yīng)速度快,無需加掩蔽劑。方法簡(jiǎn)便、快速、準(zhǔn)確,測(cè)定了香蕉、西紅柿等果蔬中的VC含量,結(jié)果令人滿意。經(jīng)多次實(shí)驗(yàn)得出該方法RsD0.32%~0.89%之間,實(shí)際測(cè)定了香蕉、西紅柿等樣品中的VC的含量,檢出限為0.2791gmL,加標(biāo)回收率在97.16%~100.18%之間 
三、高效液相色譜法

HPLC法具有檢測(cè)速度快、操作簡(jiǎn)單、實(shí)驗(yàn)結(jié)果可靠等特點(diǎn)。

HPLC檢測(cè)條件如下:
流動(dòng)相0.1%草酸溶液,流速1.0 mL/min;檢測(cè)波長(zhǎng)254 nm,進(jìn)樣量5μL,柱箱溫度3O℃。該方法分析中受樣品中其他雜質(zhì)的影響較小。測(cè)定草莓中維生素C的含量,回收率為97.4%~102.1%,說明該方法具有所需試劑少、穩(wěn)定、操作簡(jiǎn)便等特點(diǎn)。精密度實(shí)驗(yàn)的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差小于3%,說明該方法重復(fù)性和再現(xiàn)性都是比較高的。

 


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