淫羊藿為小檗科植物淫羊藿、箭葉淫羊藿、柔毛淫羊藿、巫山淫羊藿或朝鮮淫羊藿的干燥地上部分。淫羊藿具有延緩衰老、降血壓,降血糖,降血脂的功效,可以改善腦缺血缺氧、降低血液黏度、抑制體外血栓形成、刺激骨髓DNA的合成、增加外周血白細胞及骨髓造血干細胞的數(shù)量、提高免疫力、促進骨骼生長、預防骨質疏松、抗炎,抗病毒,抗腫瘤、對抗抗癌藥物的副作用。
2005版《中國藥典》一部收載的含量測定方法,一要是采用紫外分光光度法測定總黃酮的含量,二是采用高效液相色譜法測定其淫羊藿苷的含量。有關淫羊藿及其制劑中淫羊藿苷的含量測定方法主要有高效液相色譜法、薄層掃描法等。下面是高效液相色譜法的說明。
2005版《中國藥典》淫羊藿含量測定項下:
色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗:以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑;以乙腈-水(30:70)為流動相;檢測波長為207nm。理論板數(shù)按淫羊藿苷峰計算應不得低于1500。
供試品溶液的制備:取本品葉片粉末約0.2g,用十分之一天平精密稱定,置具塞錐形瓶中,精密加入稀乙醇20m,稱定重量,超聲處理1小時,放冷,再稱定重量,用稀乙醇補足減失的重量,搖勻,濾過,取續(xù)濾液,即得。
HPLC法主要的流動相系統(tǒng)有:乙腈-水系統(tǒng)、乙腈-磷酸溶液、甲醇-醋酸溶液。
樣品溶液一般以甲醇、稀乙醇為提取溶劑,凈化處理一般用聚酰胺柱或C18小柱處理;也有用正丁醇-碳酸氫鈉、乙醚-醋酸乙酯等試劑萃取。
另外,復方骨寶片中有效成分淫羊藿苷含量測定也使用高效液相色譜測定法。采用高效液相色譜儀色譜柱Shimpack ODS (4.6mm×250mm, 5Lm);流動相為乙腈-0.02 mol/L磷酸二氫鈉溶液(32:68);檢測波長為254nm;柱溫30℃。
測定淫羊藿藥材中淫羊藿苷的含量也可以采用薄層色譜-熒光分光光度法。采用熒光分光光度計;硅膠G硅膠G加0.1mol/L Na2HPO4的羧甲基纖維素鈉溶液自制板;以醋酸丁酯-甲酸-水(1.3:1:1)在10℃以下放置后的上層溶液作為展開劑;顯色劑:10% AlCl3甲醇溶液;在Ex=430nm,Em =480nm條件下測定熒光強度。藥材用70%乙醇水浴回流提取。
測定骨松寶顆粒中淫藿苷類化合物的含量采用一階導數(shù)光譜法。用UV紫外可見分光光度計。樣品供試液制備方法:骨松寶顆�!グb→加入70%乙醇,60℃水浴中加熱提取→用60℃水超聲振蕩提取→靜置過夜→用70%乙醇補足重量→上取聚酰胺柱→先用30ml蒸餾水洗脫,棄去洗脫液→再用70%乙醇洗脫,收集乙醇液,定容于50ml 的容量瓶中,即為樣品供試液。在200~400nm范圍內(nèi)自動掃描(△λ= 2nm),以一階導數(shù)峰~谷法(262~276nm) 的振幅值(D)為定量依據(jù)測定含量。