1 適用范圍
本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了食品中合成著色劑的測(cè)定方法。
2 原理
食品中人工合成著色劑用聚酰胺吸附法或液－液分配法提取，制成水溶液，注入高效液相色譜儀，經(jīng)反相色譜分離，根據(jù)保留時(shí)間定性和與峰面積比較進(jìn)行定量。最小檢出量，新紅5ng、檸檬黃4ng、莧菜紅6ng、胭脂紅8ng、日落黃7ng、赤蘚紅18ng、亮藍(lán)26ng，當(dāng)進(jìn)樣量相當(dāng)0.025g時(shí)最低檢出濃度分別為0.2mg//k；0.16mg/kg；0.24mg/kg；0.32mg/kg；0.28mg/k；0.72mg/k；1.04mg/k。
3 試劑
3.1 正己烷。
3.2 鹽酸。
3.3 乙酸。
3.4 甲醇：經(jīng)濾膜(0.5?m)過(guò)濾。
3.5 聚酰胺粉(尼龍6)：過(guò)200目篩。
3.6 乙酸銨溶液(0.02mol/L)：稱(chēng)取1.54g乙酸銨，加水至1000mL，溶解，經(jīng)濾膜(0.45?m)過(guò)濾。
3.7 氨水：量取氨水2mL，加水至100mL，混勻。
3.8 氨水－乙酸銨溶液(0.02mol/L)：量取氨水0.5mL，加乙酸銨溶液(0.02mol/L)至1000mL，混習(xí)。
3.9 甲醇－甲酸(6＋4)溶液：量取甲醇60mL，甲酸40mL，混勻。
3.10 檸檬酸溶液：稱(chēng)取20g檸檬酸(C6H8O7·H2O)，加水至100mL，溶解混勻。
3.11 無(wú)水乙醇－氨水－水(7＋2＋1)溶液：量取無(wú)水乙醇70mL、氨水20mL、水10mL，混勻。
3.12 三正辛胺正丁醇溶液(5%)：量取三正辛胺5mL，加正丁醇至100mL，混勻。
3.13 飽和硫酸鈉溶液。
3.14 硫酸鈉溶液(2g/L)。
3.15 pH6的水：水加檸檬酸溶液調(diào)pH值到6。
3.16 合成著色劑標(biāo)準(zhǔn)溶液：準(zhǔn)確稱(chēng)取按其純度折算為100%質(zhì)量的檸檬黃、日落黃、莧菜紅、胭脂紅、新紅、赤蘚紅、亮藍(lán)、靛藍(lán)各0.100g，置100mL容量瓶中，加pH6水到刻度。配成水溶液(1.00mg/mL)。
3．17 合成著色劑標(biāo)準(zhǔn)使用液：臨用時(shí)上述溶液(或?qū)?．16)加水稀釋20倍，經(jīng)濾膜(0．45?m)過(guò)濾。配成每毫升相當(dāng)50．0?g的合成著色劑。
4 儀器
高效液相色譜儀，帶紫外檢測(cè)器，254nm波長(zhǎng)。
5 分析步驟
5.1 樣品處理
5.1.1 桔子汁、果味水、果于露汽水等：稱(chēng)取20．0～40．0g，放入100mL燒杯中。含二氧化碳樣品加熱驅(qū)除二氧化碳。
5.1.2 配制酒類(lèi)：稱(chēng)取20．0～40．0g，放100mL燒杯中，加小碎瓷片數(shù)片，加熱驅(qū)除乙醇。
5.1.3 硬糖、蜜餞類(lèi)、淀粉軟糖等：稱(chēng)�。�5．00～10．00小粉碎樣品，放入100mL小燒杯中，加水30mL，溫?zé)崛芙猓魳悠啡芤簆H值較高，用檸檬酸溶液調(diào)pH值到6左右。
5.1.4 巧克力豆及著色糖衣制品：稱(chēng)取5．00～10．00g，放入100mL小燒杯中，用水反復(fù)洗滌色素，到巧克力豆無(wú)色素為止，合并色素漂洗液為樣品溶液。
5.2 色素提取
5.2.1 聚酞胺吸附法：樣品溶液加檸檬酸溶液調(diào)pH值到6，加熱至60℃，將1g聚酞胺粉加少許水調(diào)成粥狀，倒入樣品溶液中，攪拌片刻，以G3垂融漏斗抽濾，用60℃pH=4的水洗滌3～5次，然后用甲醇-甲酸混合溶液洗滌3～5次(含赤薛紅的樣品用5．2．2法處理)，再用水洗至中性，用乙醇-氨水-水混合溶液解吸3～5次，每次5mL收集解吸液，加乙酸中和，蒸發(fā)至近干，加水溶解，定容至5mL經(jīng)濾膜(0．45?m)過(guò)濾，取10?L進(jìn)高效液相色譜儀。 5.2.2 液-液分配法(適用于含赤躥紅的樣品)：將制備好的樣品溶液放入分液漏斗中，加2mL鹽酸、三正辛胺正丁醇溶液(5％)10～20mL，振搖提取，分取有機(jī)相，重復(fù)提取，至到有機(jī)相無(wú)色，合并有機(jī)相，用飽和硫酸鈉溶液洗2次，每次10mL，分取有機(jī)相，放蒸發(fā)皿中，水浴加熱濃縮至10mL，轉(zhuǎn)移至分液漏斗中，加60mL正己烷，混勻，加氨水提取2～3次，每次5mL合并氨水溶液層(含水溶性酸性色素)，用正己烷洗2次，氨水層加乙酸調(diào)成中性，水浴加熱蒸發(fā)至近干，加水定容至5mL經(jīng)濾膜(0．45?m)過(guò)濾，取10?L進(jìn)高效液相色譜儀。
5.3 高效液相色譜參考條件
5.3.1 柱：YWG-Cl8 10?m不銹鋼柱4．6mm(id)×250mm。
5.3.2 流動(dòng)相：甲醇-0．02 mol／L乙酸鉸溶液(pH=4)。
5.3.3 梯度洗脫：甲醇：20％～35％，3％／min；35％～98％，9％／min；98％繼續(xù)6min。
5.3.4 流速：lmL／min。
5.3.5 紫外檢測(cè)器，254nm波長(zhǎng)。
5.4 測(cè)定
取相同體積樣液和合成著色劑標(biāo)準(zhǔn)使用液分別注入高效液相色譜儀，根據(jù)保留時(shí)間定性，外標(biāo)峰面積法定量。
5.5 計(jì)算
式中：X1——樣品中著色劑的含量，g/kg；
m1——樣液中著色劑的質(zhì)量，?g；
V2——進(jìn)樣體積，mL；
V1——樣品稀釋總體積，mL；
m2——樣品質(zhì)量，g。
結(jié)果的表述：報(bào)告算術(shù)平均值的二位有效數(shù)。
5.6 允許差
相對(duì)相差≤10%。
