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新聞動態(tài)

熒光分光光度計測試需要的幾大步驟

時間:2023-10-20 12:18:09      閱讀:516

熒光分光光度計測試需要的幾大步驟:


  (一)樣品準備
 

  1.液體樣品根據(jù)用戶提供的技術指標,檢查濃度范圍是否合適,如果需要稀釋,則要考慮所需溶劑類型和稀釋倍數(shù)。
 

  2.固體樣品均勻粉末、片狀或具有光滑平面的塊狀樣品,均可直接測定。
 

  (二)操作步驟
 

  1.開機:接通電源,打開主機開關,點燃(打開)光源后,根據(jù)說明書要求啟動計算機。
 

  2.檢測前準備:參照儀器說明書,在20天內(nèi)至少進行一次激發(fā)校準和發(fā)射校準,檢測前儀器應預熱。
 

  3.工作條件的選擇:環(huán)境溫度應在20℃±5℃;相對濕度不大于70%;電源穩(wěn)定,無磁場、電場干擾。根據(jù)樣品的特性及熒光強度,選擇合適的儀器工作條件(如狹縫、PM增益、響應時間等)。
 

  4.基本測定
 

  (1)熒光激發(fā)光譜測定
 

  設置儀器參數(shù),掃描發(fā)射波長,找到maxλem,以此為發(fā)射波長,記錄發(fā)射強度作為激發(fā)波長的函數(shù),便得到激發(fā)光譜。
 

  (2)熒光發(fā)射光譜測定
 

  設置儀器參數(shù),掃描激發(fā)波長,找到maxλex,以此為激發(fā)波長,記錄發(fā)射強度與發(fā)射波長間的函數(shù)關系,便得到熒光發(fā)射光譜。
 

  (3)差譜測定
 

  設置熒光分光光度計參數(shù),選擇合適的工作方式,測定背景溶液的發(fā)射光譜并儲存起來,在一定的工作方式下,掃描樣品溶液的發(fā)射波長,得到當時的光度值和儲存的背景值之間的差示值,即差譜。
 

  (4)峰面積積分
 

  選擇適當?shù)墓ぷ鞣绞�,對樣品溶液進行積分操作,即得到峰面積積分。
 

  (5)熒光強度
 

  選擇合適的測量參數(shù),設置λex、λem,采用定點讀數(shù)或掃描方式,即可測得所選波長處的熒光強度。
 

  (6)定量測定
 

  配制一系列已知濃度的標準溶液,在一定的測定條件下,設置λex、λem,按照由稀至濃的次序,測定標準溶液的熒光強度,繪制熒光強度—濃度的工作曲線,不改變儀器參數(shù)測定未知溶液的熒光強度,由工作曲線即可求出未知溶液的濃度。
 

  (三)分析結果的表述
 

  1.熒光激發(fā)光譜、發(fā)射光譜以及其他光譜由儀器控制電腦直接繪出。
 

  2.峰面積積分、熒光強度由儀器控制電腦計算顯示。
 

  3.定量測試:在相同的測定條件下,測定一系列已知濃度的標準溶液的熒光強度,繪制出熒光強度-濃度的工作曲線。濃度未知的溶液的熒光強度測定后,由工作曲線求出該溶液的濃度。


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