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技術(shù)支持

常見(jiàn)的高效液相色譜法有哪些

時(shí)間:2017-6-22 10:24:09      閱讀:1740

一、液固吸附色譜法(LSC)      

 流動(dòng)相為液體,固定相為固體吸附劑。

1、分離機(jī)制:利用溶質(zhì)分子占據(jù)固定相表面吸附活性中心能力差異; 

分離前提:K不等或k不等;

2、固定相:與LC比,固定相粒徑不同(<10μm); 

3、流動(dòng)相:底劑(烷烴)+有機(jī)極性調(diào)節(jié)劑。

4.影響K的因素:

與固定相性質(zhì)和流動(dòng)相性質(zhì)有關(guān);

溶質(zhì)分子極性↑,洗脫能力↓,k↑,tR↑;

溶劑系統(tǒng)極性↑,洗脫能力↑,k↓,tR↓;

注:調(diào)節(jié)溶劑極性,可以控制組分的保留時(shí)間;

5、出柱順序:強(qiáng)極性組分后出柱,弱極性組分先出柱;

6、硅膠吸水量↑,LSC→LLC

硅膠含水量較小,吸附色譜,硅膠極性較大;

硅膠含水量>17% ,分配色譜,硅膠失活→載體;

吸附的水→固定液

二、液-液分配色譜法(LLC

1、分離機(jī)制:利用組分在兩相中溶解度的差異

2、固定相:載體+固定液(物理或機(jī)械涂漬法)

缺點(diǎn):

系統(tǒng)內(nèi)部壓力大,易流失,不實(shí)用

固定液-極性→NLLC

固定液-非極性→RLLC

3、①正相色譜-固定液極性>流動(dòng)相極性(NLLC)

極性小的組分先出柱,極性大的組分后出柱:適于分離極性組分;

②反相色譜-固定液極性<流動(dòng)相極性(RLLC)

極性大的組分先出柱,極性小的組分后出柱:適于分離非極性組分;

三、化學(xué)鍵合相色譜法(BPC

1、化學(xué)鍵合相 

(1)分離機(jī)制:分配+吸附(以LLC為基礎(chǔ));

(2)特點(diǎn):不易流失;熱穩(wěn)定性好;化學(xué)性能好;載樣量大;適于梯度洗脫;

2、反相鍵合相色譜

(1)分離機(jī)制:疏溶劑理論; 

正相-流動(dòng)相與溶質(zhì)排斥力強(qiáng),作用時(shí)間↑,K↑,組分tR↑;

反相-流動(dòng)相與溶質(zhì)排斥力弱,作用時(shí)間↓,K↓,組分tR↓;

(2)固定相:極性小的烷基鍵合相;

C8柱,C18柱(ODS柱-HPLC約80%問(wèn)題);

(3)流動(dòng)相:

極性大的甲醇-水或乙腈-水;

流動(dòng)相極性>固定相極性;

底劑+有機(jī)調(diào)節(jié)劑(極性調(diào)節(jié)劑);

例:水+甲醇,乙腈,THF;

(4)流動(dòng)相極性與k的關(guān)系:流動(dòng)相極性↑,洗脫能力↓,k↑,組分tR↑

(5)出柱順序:極性大的組分先出柱;極性小的組分后出柱;

(6)適用:非極性~中等極性組分(HPLC 80%問(wèn)題)

3、正相鍵合相色譜

(1)分離機(jī)制:溶質(zhì)分子與固定相之間定向作用力、誘導(dǎo)力、或氫鍵作用力

(2)固定相:極性大的氰基或氨基鍵合相;

(3)流動(dòng)相:極性�。ㄍ琇SC);底劑+有機(jī)極性調(diào)節(jié)劑; 例:正己烷+氯仿-甲醇,氯仿-乙醇。

(4)流動(dòng)相極性與K的關(guān)系:流動(dòng)相極性↑,洗脫能力↑,組分tR↓,k↓;

(5)出柱順序:結(jié)構(gòu)相近組分,極性小的組分先出柱,極性大的組分后出柱;

(6)適用:氰基鍵合相與硅膠的柱選擇性相似(極性稍�。�,分離物質(zhì)也相似;氨基鍵合相與硅膠性質(zhì)差別大,堿性,分析極性大物質(zhì)、糖類等;

4、離子對(duì)色譜和離子抑制色譜

反相離子對(duì)色譜法(IPC或PIC) 

反相色譜中,在極性流動(dòng)相中加入離子對(duì)試劑,使被測(cè)組分與其中的反離子形成中性離子對(duì),增加K和tR,以改善分離;

(1)離子對(duì)試劑:烷基磺酸鈉→分析堿,四丁基季胺鹽→分析酸

(2)影響K的因素:

a.與m的極性有關(guān)(同反相色譜);

b.與R的鏈長(zhǎng)有關(guān):R↑長(zhǎng),極性↓小,tR↑,k↑;

(3)適用:

較強(qiáng)的有機(jī)酸、堿;反相離子抑制色譜;

在反相色譜中,通過(guò)加入緩沖溶液調(diào)節(jié)流動(dòng)相pH值,抑制;

組分解離,增加其K和tR,以達(dá)到改善分離目的;

1)離子抑制劑:弱酸、弱堿性物質(zhì); pH一定的緩沖溶液;

2)K的影響因素:與流動(dòng)相極性有關(guān),還與pH值有關(guān);

選擇流動(dòng)相:應(yīng)同時(shí)考慮極性及pH值; 

酸性物質(zhì)-加入酸HAc,tR↑,K↑; 

堿性物質(zhì)-加入堿NH3·H2O,tR↑,K↑;  

調(diào)節(jié)pH范圍:3.0~8.0;pH>8.0破壞鍵合相與載體的結(jié)合;pH<3.0腐蝕柱子;

3)適用:

極弱酸堿物質(zhì);pH=3~7弱酸;pH=7~8弱堿;兩性化合物。

(內(nèi)容參考小木蟲(chóng)論壇)

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