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技術(shù)支持

液相色譜柱參數(shù)和沖洗方法介紹

時間:2017-1-5 10:46:55      閱讀:2155

一、液相色譜柱的相關(guān)參數(shù)

1、表面積

顆粒外表面和內(nèi)部孔表面的總和,以m2/gram表示。

高表面積對于多組份樣品的分離具有較強的保留能力,柱容量和分離度。表面積低的填料通常能迅速達到平衡狀態(tài),對于梯度淋洗尤為重要。

2、孔徑

顆粒的孔或腔的平均尺寸,范圍60-10,000Å。

大孔的填料顆�?梢匝娱L溶質(zhì)大分子在填料表面滯留的時間,達到充分分離,改善峰形;樣品MW≤4000,選擇80Å的孔徑,樣品MW>4000選擇300Å的孔徑

3、碳覆蓋率

對色譜分離的影響,與基體物質(zhì)相連的鍵合相的量。

高碳覆蓋率可以提高分辨率,分析時間長。低碳覆蓋率縮短運行時間。

4、封端/封尾

封端對色譜分離的影響,使用較短烷烴鏈鍵合游離硅羥基(二次鍵合)

封端就是減輕待測組份與硅膠表面殘留的酸性硅羥基反應(yīng)而引起的色譜峰拖尾現(xiàn)象,對于極性樣品,未封端與經(jīng)過封端處理的色譜柱在選擇性上有明顯差異。

5、粒徑

1.8um~3.5um便于快速分離,5um是行業(yè)標準,7um是制備柱。

二、如何沖洗液相色譜柱

1、對于反相色譜柱的沖洗

用以下溶劑至少各25mL沖洗色譜柱(分析柱):不含緩沖鹽的流動相、100%甲醇、100%乙腈、75%乙腈+25%異丙醇、100%異丙醇、100%二氯甲烷、100%己烷。

注意若使用己烷或二氯甲烷沖洗色譜柱,則在重新使用反相流動相以前,必須用異丙醇沖洗色譜柱。

2、對于正相色譜柱的沖洗

用以下溶劑至少各50mL沖洗色譜柱(分析柱):50%甲醇+50%三氯甲烷、100%乙酸乙酯。

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