722分光光度計基線校正的原因、方法和注意事項
對于雙光束分光光度計而言在使用前必須要做基線校正（也稱為基線記憶）。
一、為何要做基線校正
眾所周知，光度計的光學系統(tǒng)基本是由光源（氘燈、鎢燈）、單色器（光柵、狹縫）、檢測器（光敏二極管、光電倍增管）等三部分組成的。在我們使用的波長區(qū)域中，上述部件在不同的波長下的響應(yīng)值（光源的發(fā)射強度、單色器的色散強度、檢測器的放大倍數(shù)）均不相同。通俗地說、即使沒有樣品，儀器如果不做基線校正，那么在190nm至 1100nm的范圍中，吸光值或透過率不會是一條直線，這是一種客觀的物理現(xiàn)象。
二、被校正的基線種類和用途
1)系統(tǒng)基線
所謂系統(tǒng)基線就是儀器固有的波長范圍的總基線。例如一臺儀器出廠設(shè)計的波長全程范圍是190nm至1100nm，那么它的系統(tǒng)基線就是這個范圍。一般來講，作為分析人員對一臺儀器做全程掃描測試是比較少見的。之所以要做系統(tǒng)基線的目的一般是將儀器的光學系統(tǒng)的響應(yīng)值校正到基本一致。
2)用戶基線
所謂用戶基線就是分析者自己設(shè)定的測量波長區(qū)域的一段基線。由于這是分析所需要的區(qū)域，為了保證測試的準確性，故用戶基線的校正是非常重要和必要的。
三、基線校正的方法
1) 系統(tǒng)基線校正
系統(tǒng)基線的校正較為簡單，一般情況下樣品室內(nèi)不放樣品，僅做光學系統(tǒng)的校正。如果一定要使用全波段的測量那另當別論。
同時需要注意的是系統(tǒng)基線無需經(jīng)常校正，一般半個月或一個月校正校正一次即可。對有的儀器來說，系統(tǒng)基線校正過于頻繁反而會造成基線漂移嚴重。
2) 用戶基線校正
正確的校正方法是：兩只比色杯盛有空白溶液分別放置在樣品及參比光路中，校正波長范圍要大于分析波長范圍。例如分析設(shè)定范圍為220nm—500nm，那么校正波長就要設(shè)定為210nm—510nm，等待校正結(jié)束后再將波長設(shè)定回到原來的220nm—500nm范圍。
這種校正方法如果校正波長與分析波長完全吻合一致，有可能在校正后的基線兩端出現(xiàn)大的噪聲，如果校正范圍大于實際分析范圍并掐頭去尾后可以提高分析精度。
值得注意的是，有的儀器操作者在做基線校正時，參比一側(cè)不放參比溶液，也就是用空氣來做參比對照。這種方法在可見區(qū)對有的樣品也許有時影響不大，但在紫外區(qū)影響就會很明顯了。嚴格的說，用空氣做參比所測得的結(jié)果不是真正意義上的校正光譜。
四、基線校正的注意事項
1) 基線校正時要保證儀器有一定的預(yù)熱時間
2) 每更換一種參比溶液后均要重新做基線校正
3) 如果參比溶液的吸光度大于樣品的吸光度值時測試結(jié)果會出現(xiàn)負值，此時要考慮使用何種溶液做基線校正了。
4) 做基線校正時要考慮試劑的使用波長范圍問題，因為有的試劑在某個波長以下的吸光度值會無限大，這時去做校正會超出儀器的有效量程范圍，無法得到真正的結(jié)果。關(guān)于試劑的使用波長范圍，目前一般在試劑瓶的標簽上會有標注。
