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技術(shù)支持

高效液相色譜法特點

時間:2015-11-3 9:51:57      閱讀:1756

高效液相色譜法(high performance liquid chromatography,HPLC)是在經(jīng)典液相色譜法基礎(chǔ)上發(fā)展起來的一種新型分離、分析技術(shù)。經(jīng)典液相色譜法由于使用粗顆粒的固定相,填充不均勻,依靠重力使流動相流動,因此分析速度慢,分離效率低。新型高效的固定相、高壓輸液泵、梯度洗脫技術(shù)以及各種高靈敏度的檢測器相繼發(fā)明,高效液相色譜法迅速發(fā)展起來。

高效液相色譜法與經(jīng)典液相色譜法比較,具有下列主要特點:

1.高效由于使用了細(xì)顆粒、高效率的固定相和均勻填充技術(shù),高效液相色譜法分離效率極高,柱效一般可達(dá)每米104理論塔板。近幾年來出現(xiàn)的微型填充柱(內(nèi)徑lmm)和毛細(xì)管液相色譜柱(內(nèi)徑0.05umm),理論塔板數(shù)超過每米105,能實現(xiàn)高效的分離。

2.高速由于使用高壓泵輸送流動相,采用梯度洗脫裝置,用檢測器在柱后直接檢測洗脫組分等,HPLC完成一次分離分析一般只需幾分鐘到幾十分鐘,比經(jīng)典液相色譜快得多。

3.高靈敏度紫外、熒光、電化學(xué)、質(zhì)譜等高靈敏度檢測器的使用,使 HPLC 的最小檢測量可達(dá) 10-9~10-11g

4.高度自動化計算機(jī)的應(yīng)用,使 HPLC 不僅能自動處理數(shù)據(jù)、繪圖和打印分析結(jié)果,而且還可以自動控制色譜條件,使色譜系統(tǒng)自始至終都在最佳狀態(tài)下工作,成為全自動化的儀器。

5.應(yīng)用范圍廣(與氣相色譜法相比)  HPLC 可用于高沸點、相對分子質(zhì)量大、熱穩(wěn)定性差的有機(jī)化合物及各種離子的分離分析。如氨基酸、蛋白質(zhì)、生物堿、核酸、甾體、維生素、抗生素等。

6.流動相可選擇范圍廣  它可用多種溶劑作流動相,通過改變流動相組成來改善分離效果,因此對于性質(zhì)和結(jié)構(gòu)類似的物質(zhì)分離的可能性比氣相色譜法更大。

7.餾分容易收集  更有利于制備。


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