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一、原理

    在一定條件下，有機(jī)磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥對(duì)膽堿酯酶正常功能有抑制作用，其抑制率與農(nóng)藥的濃度呈正相關(guān)系。正常情況下，酶催化神經(jīng)傳導(dǎo)代謝產(chǎn)物（乙酰膽堿）水解。其水解產(chǎn)物與顯色劑反應(yīng)，產(chǎn)生黃色物質(zhì)，用分光光度計(jì)測(cè)定吸光度隨時(shí)間的變化值，計(jì)算抑制率，通過(guò)抑制率可以判斷出樣品是否含有有機(jī)磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥的存在。

二、應(yīng)用儀器

分光光度計(jì)、電子天平、燒杯等

三、分析步驟

1、樣品處理

選取有代表性的蔬菜樣品，擦去表面泥土，剪成1cm左右見(jiàn)方碎片，取樣品1g，放入燒杯或提取瓶中，加5ml緩沖液，震蕩1~2min，倒出提取液，靜止3~5min待用。

2、測(cè)定

   對(duì)照溶液測(cè)定：先于試管中加入2..5mi緩沖液，再加入0.1ml酶液，0.1ml顯色劑，搖勻后于37℃放置15min以上（每批樣品的控制時(shí)間應(yīng)一致）。加入0.1ml底物，此時(shí)溶液開(kāi)始顯色反應(yīng)，應(yīng)立即放入儀器比色池中，記錄反應(yīng)3分鐘的吸光度變化值ΔA₀

樣品測(cè)試：先于試管中加入2..5ml樣品提取液，其它操作與對(duì)照溶液測(cè)試相同，記錄反應(yīng)3分鐘的吸光度變化值ΔA_t

3、結(jié)果計(jì)算

抑制率%＝［(ΔA₀-ΔA_t)/ ΔA₀］×100%

式中：ΔA₀--------對(duì)照溶液反應(yīng)3min吸光值的變化值；

      ΔA_t-------樣品溶液反應(yīng)3min吸光值的變化值；

4、結(jié)果判定

當(dāng)蔬菜樣品提取液對(duì)酶的抑制率≥50%時(shí)，表示蔬菜中有有機(jī)磷或氨基甲酸酯類農(nóng)藥存在。抑制率≥50%的樣品需重復(fù)檢驗(yàn)2次以上。

對(duì)抑制率≥50%的樣品，可用其它方法進(jìn)一步確定具體農(nóng)藥品種和含量。

應(yīng)用流程圖如下：